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        首頁疫病防控

        疫病防控

        PREVENTION AND CONTROL

        藥敏試驗操作方法
        發布時間:2016-12-22

        藥敏試驗根據美國臨床標準委員會(NCCLS)推薦的K-B瓊脂法進行,藥敏紙片選擇中國生物制品鑒定所藥敏紙片,試驗所選擇藥物必須包括下列抗生素:氨芐西林(AMP),阿莫西林/克拉維酸(AMC),頭孢噻吩(CFT),頭孢噻肟(CTX),慶大霉素(GEN),萘啶酸(NAL),諾氟沙星(NOR),四環素(TBT),利福平(RFA),復方新喏明(SMZ)。

        1 操作方法:

        (1)將待檢菌接種于普通營養瓊脂平板,37℃培養16~18小時,然后挑取普通營養瓊脂平板上的純培養菌落,懸于3ml生理鹽水中,混勻后與菌液比濁管比濁。以有黑字的白紙為背景,調整濁度與比濁管(0.5麥氏單位)相同。

        (2)用無菌棉拭子蘸取菌液,在管壁上擠壓去掉多余菌液。用棉拭子涂布整個M-H培養基表面,反復幾次,每次將平板旋轉60度,最后沿周邊繞兩圈,保證涂均勻。

        (3)待平板上的水分被瓊脂完全吸收后再貼紙片。用無菌鑷子取藥敏紙片貼在平板表面,紙片一貼就不可再拿起。每個平板貼5張紙片,每張紙片間距不少于24mm,紙片中心距平皿邊緣不少于15mm。在菌接種后15分鐘內貼完紙片。

        (4)將平板反轉,孵育18~24小時后取出,用游標卡尺測量抑菌圈直徑,從平板背面測量最接近的整數毫米數并記錄(附表5)。抑菌環的邊緣以肉眼見不到細菌明顯生長為限。有的菌株可出現蔓延生長,進入抑菌環,磺胺藥在抑菌環內出現輕微生長,這些都不作為抑菌環的邊緣。結果判斷依據鑒定所藥敏紙片判定標準。

        2 注意事項:

        (1)制備MH瓊脂平板應用直徑90mm平皿,在水平的實驗臺上傾注。瓊脂厚為4±0.5mm(約25-30ml培養基),瓊脂凝固后塑料包裝放4℃保存,在5日內用完,使用前應在37℃培養箱烤干平皿表面水滴。傾注平皿前應用pH計測pH值是否正確(pH應為7.3)。pH過低會導致氨基糖苷類,大環內酯類失效,而青霉素活力增強。

        (2) 藥敏紙片長期儲存應于-20℃,日常使用的小量紙片可放在4℃,但應至于含干燥劑的密封容器內。使用時從低溫取出后,放置平衡到室溫后才可打開,用完后應立即將紙片放回冰箱內的密封容器內。 過期紙片不能使用, 應棄去。

        (3) 不穩定藥物如亞胺培南, 頭孢克洛, 克拉維酸復合藥等, 應冷凍保存, 最好在-40 ℃以下。

        (4) 保證質控菌株不變異的簡便方法,將新得到的凍干菌株接種含血的M-H平板復活。然后每株細菌接種10支高層瓊脂管,放置冰箱保存。每月取出一支,傳出細菌供常規用。待用剩至最后一支,可傳種在M-H平板上,再接種一批高層瓊脂管備用。如此可保證原始菌種永不接觸抗菌素。

        3質量控制:

        (1)質量控制方法 


        是用與常規實驗相同的操作方法,測定質控菌株的抑菌環。應使用新鮮傳代的菌種。接種菌液的涂布方法等均同常規操作,測定的抗菌素種類也應與常規測定的種類相同。按表2所列的數據測定相應菌株的抑菌環,并記錄結果。

        (2)質控試驗頻率


        用新一批MH瓊脂或新抗生素紙片時做質控。每日試驗時, 同時做質控—監測系統整體質量。在每日合格的基礎上,可改為每周做。一個藥物/細菌組合連續30天的抑菌圈直徑結果中, 超出準確質控范圍的不多于3個,如符合要求, 每一質控菌株可以每周進行質控而不必每日進行。

        (3)失控

        一旦發現失控,應從培養基、紙片、接種菌液等方面去查找原因,并及時糾正。無明顯錯誤而出現失控結果時要恢復每天質控, 直至找到錯誤原因并提出解決辦法為止;用合適質控菌株連續測試5天, 所有5個抑菌圈直徑都在允許范圍內;恢復每周作之前,應有30個試驗日有滿意結果。


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